实验报告2024篇10

1.系统设置

取30个1L容量的大烧杯，洗净。将生长态势比较一致的5种植物从清水中取出，植物根部用15%的双氧水灭菌处理10分钟后，用蒸馏水清洗干净，按照每组湿地植物湿重相等的原则，放入大烧杯。将烧杯分成5组，分别栽种香蒲、绿萝、青岛藨草、酸模、毛茛，每一组由两小组组成，栽种香蒲的两小组编号为X和X0，栽种绿萝的两小组编号为L和L0，栽种青岛藨草的两小组编号为Q和Q0，栽种酸模的两小组编号为S和S0，栽种毛茛的两小组编号为M和M0，每组中前者中加入250ml自配污水，后者作为对照加入等量的自来水。

2.测定方法

2.1磷酸酶测定方法

2.1.1根中酸性磷酸酶：

酶液提取：称取植物根系材料0.1g，放入研钵，再向其中加入1ml磷酸缓冲液(PH7.8)，小心研磨至匀浆，再将其全部吸入离心管中，在0℃下1200r/min转速的条件下，离心30min，上清液为待测液，取0.5ml。

具体方法：取配置好的pH为5.8的0.2mol·L-1醋酸钠缓冲液70ml，以之为溶剂配成浓度为0.15g·L-1对硝基苯磷酸二钠(pNPP)酶反应液，加入0.5ml酶液后将其用黑纸包裹，置于25℃下培养1小时。向其中加入1ml3NNaOH溶液，以终止酶促反应，使用α-1860S紫外可见分光光度计在405nm波长处进行比色测定。在单位时间内单位重量鲜根水解pNPP生成的pNP量来表示酶活性(μg·h-1·g-1鲜根)。

2.1.2根中碱性磷酸酶：测定方法与酸性磷酸酶的类似，唯一的区别是酶反应液是由Tris-HCl缓冲液(pH=8.7)配制的。

2.1.3水中酸性磷酸酶：取0.5ml污水作为水中酸性磷酸酶的酶液。具体方法同根中酸性磷酸酶。

2.1.4水中碱性磷酸酶：取0.5ml污水作为水中碱性磷酸酶的酶液。具体方法同根中碱性磷酸酶。

2.2脲酶测定方法

2.2.1根中脲酶活性：奈氏试剂显色法。

酶液提取：称取植物根系材料0.1g，放入研钵，再向其中加入1ml磷酸缓冲液(PH7)，小心研磨至匀浆，再将其全部吸入离心管中，在0℃下1200r/min转速的条件下，离心30min，上清液为待测液，取0.5ml。

具体方法：取适量的干净试管，并给试管编号，依次向其中加入2mL0.3mol/L尿素-0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH7)，然后将试管放入37℃恒温水浴锅中，并预热5min。1号管作为空白对照，向其中加入0.5mL水，向其余试管分别加入0.5mL酶液，将所有试管混匀后在37℃水浴锅中恒温水浴条件下反应5min。在反应结束后向各个试管加入1.5mL10%三氯乙酸使反应终止。取其中的1mL反应液，加入9mL蒸馏水稀释反应液，摇匀后先加入0.5mL10%酒石酸钾钠反应一会，再加入1.0mL奈氏试剂显色。在波长420nm时测定各管溶液的吸光度，1号管作对照。最后做出硫酸铵浓度标准曲线，据此方程计算酶活，测得铵浓度与吸光度关系拟合方程为OD420=0.006C+0.0082(R2=0.9991)。

2.2.2水中脲酶活性：同根中脲酶活性测定方法，但酶液是直接取0.5mL的污水。