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提取RNA时,要特别注意防止RNase的污染,所用玻璃器皿均应用0.1%的二乙基焦碳酸盐(diethylpyrocarbonate,DEPC)处理。塑料器材均使用一次性用品,并高压灭菌处理,必要时,也可用0.1%DEPC处理。
篇二:真核细胞RNA的提取RNA是基因表达产物,由以下几类分子组成,rRNA(占细胞总RNA的80%~85%)、tRNA和核内小分子RNA(占10~15%)、mRNA(占1~5%)。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象,分离制备mRNA是克隆基因,分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。
真核细胞总RNA分离提取的目的是要获得高纯度的具有充分长度的RNA分子,包括RNA的纯度和完整性。RNA分离的关键是尽量减少RNA酶的污染。RNA酶活性非常稳定,分布广泛,除细胞内源性的RNA酶外,环境中也存在RNA酶。因此在提取RNA时,应尽量创造一个无RNA酶的环境,包括去除外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶活性。主要是采用RNA酶的阻抑蛋白RNasin和强力的蛋白质变性剂盐酸胍或异硫氰酸胍抑制内源性RNA酶,采用焦碳酸二乙酯(DEPC)去除外源性RNA酶。